V roce 2014 byla na našem pracovišti zavedena metodika izolace CD14+ mononukleárních buněk z periferní krve metodou, která je založena na využití gradientové centrifugace.Mononukleární buňky představují důležitý marker, který lze využít při monitorování a hodnocení celé řady patofyziologických stavů (zánětlivá reakce, kardiovaskulární onemocnění, nádorová onemocnění). Na základě množství mononukleárních buněk a identifikace a kvantifikace některých prozánětlivých faktorů jimi produkovaných, je možné také sledovat projevy a intenzitu zánětlivých reakcí, které provází obezitu a metabolický syndrom [1]. Pro monitorování produkce a kvantifikaci prozánětlivých cytokinů se v současné době využívá některých moderních biochemických a molekulárně biologických metod. Tyto metody umožňují na úrovni genové exprese jak kvalitativně, tak i kvantitativně stanovit sledované cílové molekuly. Jednou z nejpoužívanějších technik, která výše uvedené splňuje, je ?real time? PCR. Výchozím materiálem pro zmíněnou techniku je komplementární cDNA (complementary DNA) získaná reverzní transkripcí RNA izolované z příslušného biologického vzorku, v našem případě z CD14+ monocytů. Vzhledem k tomu, že produktem reverzní transkripce je hybridní RNA-DNA molekula, která není vhodná k další analýze, je nutné sledované strukturní geny kódující prozánětlivé cytokiny amplifikovat pomocí PCR. Takto vzniklý produkt (cDNA) lze následně použít jako matrici pro ?real time? PCR [2].