phenotyping CYP2D6 - metoprolol - ?-hydroxymetoprolol - HPLC-FL

V práci je popsána metoda vysokoúčinné kapalinové chromatografie, která byla zavedena pro účely fenotypizace enzymu CYP2D6 metoprololem jako substrátovou látkou. Metoprolol, ?-hydroxymetoprolol a nadolol (vnitřní standard) byly extrahovány ze séra dichlormethanem s přídavkem 1 mol/l NaOH. Látky byly separovány na koloně s reverzní fází SupercosilTM LC-18 (150x3 mm, 5 ?m) mobilní fází o složení acetonitril-methanol-voda-triethylamin (15:5:80:0,1; pH 3,0) při průtoku 0,7 ml/min. Fluorescenční detekce (FL) probíhala při vlnové délce 230 a 300 nm. Celková doba analýzy byla 12 min. Přesnosti v sérii a mezi sériemi vyjádřené jako relativní směrodatné odchylky byly nižší než 7,2 % a recovery se pohybovalo v rozmezí 98,2-103,0 %. Kalibrační křivka byla lineární v rozmezí 25 - 500 ng/ml (r = 0,999) pro obě látky. Detekční limit byl stanoven pro metoprolol a ?-hydroxymetoprolol na 5 ng/ml a kvantifikační limit na 25 ng/ml.

High-performance liquid chromatography method has been developed with a view of its future use in the phenotyping of CYP2D6 enzyme by metoprolol as a probe drug. Metoprolol, ?-hydroxymetoprolol and internal standard nadolol were extracted from serum with dichlormethane alkalinized with 1mol/l NaOH. Chromatographic separations were performed on a reversed-phase column SupercosilTM LC-18 (150x3 mm, 5 ?m) with a mobile phase containing acetonitril-methanol-water-triethylamine (15:5:80:0.1, pH 3.0) at a flow rate of 0.7 ml/min. Fluorescence detection (FL) was made at 230 and 300 nm. The total analysis time was 12 min. The intra-assay and inter-assay precisions (coefficients of variation) were less than 7.2 %, and recovery values were found to be within 98.2-103.0 %. The calibration curve was linear over a concentration range 25-500 ng/ml (r = 0.999) for both compounds. The limit of detection was 5 ng/ml and limit of quantification was 25 ng/ml for both metoprolol and ?-hydroxymetoprolol.